Приготовленный и уложенный компост засевают кусочками грибницы шампиньона. Грибница должна быть свежей и стерильной (не содержащей на своих тканях возбудителей инфекции — бактерий, низших грибов). Обычно грибницу такого состояния можно получить только в условиях оснащенной специальным оборудованием лаборатории. Здесь предназначенные для переноса грибницы субстраты — зерно или компост проходят спецподготовку — стерилизацию. Стерилизация для уничтожения спор вредных микроорганизмов производится при помощи автоклава. Автоклав представляет собой котел, внутри которого создаются температура и давление пара, губительные для вредных микроорганизмов. Побывав в нем определенное количество времени, питательный субстрат очищается от присутствия чужеродных организмов в какой бы то ни было форме. Полученную чистую среду (зерно или компост) засевают (в условиях строгой антисептики) спорами шампиньонов. В дальнейшем из них прорастает грибница, а сами зерно или компост начинают играть роль ее носителей. Подкармливаясь ими время от времени, грибница обосновывается в них, словно в некоем жилище, ожидая «приглашения» на этап заложения культуры. Если такого рода «приглашение» затягивается, то в ее жизнедеятельности могут возникнуть осложнения, приводящие нередко даже к гибели. В связи с этим необходимо учитывать, что оптимальный срок хранения грибницы до посева на зерне (в холодильнике) при температуре 0-+3°С составляет около 3 месяцев, на компосте — до года.
Зерновая грибница отличается большей урожайностью, но вместе с тем обладает довольно капризным характером. Отчасти это связано с тем, что с детства грибница была окружена обилием питательных веществ, их доступность и калорийность «избаловали» ее. Грибница, выращенная на зерне, предъявляет высокие требования к качеству субстрата и условиям выращивания. Любое незначительное отклонение способно повлиять на ее активную работоспособность. Поэтому начинающим грибоводам лучше всего приобретать компостный посадочный материал — грибницу, развитую на компосте. С самого начала обустройства в относительно бедной питательной среде она жила заботой о выживании, чем, несомненно, подготавливала, силы на будущее быть способной постоять за себя. Такая грибница довольно успешно обходит препятствия, вызванные оплошностью при приготовлении компоста, а также несоблюдением оптимальных условий для разведения культуры.
В России с 1983 года на выращивании качественного посадочного материала специализируется совхоз «Заречье» в Московской области. На его базе функционирует завод, выпускающий до 500 тысяч литров грибницы в год. На изготовление отвечающего всем стандартам материала уходит 3-4 месяца кропотливой работы. За несколько лет на заводе была создана собственная коллекция продуктивных, устойчивых к болезням штаммов (сортов), обеспечивающих высокие урожаи. Их количество достигает 30. Различаются они тем, что из них вырастают шампиньоны разного цвета и вида: с белыми, кремовыми, коричневыми шляпками, гладкие, с чешуйками, маленькие, большие — одним словом, грибы на любой вкус. Коммерческая грибница выпускается двух распространенных видов — зерновая и компостная. Зерновая грибница поступает в продажу в перфорированных целлофановых пакетах, компостная — в стеклянных банках.
Обычно грибницей из одной банки засевают 1,5 м2 площади гряды, а зерновым мицелием из пакета — 3 м2.
Перед посадкой грибницу, хранившуюся в холодильнике, следует прогреть в течение суток при комнатной температуре.
Можно попытаться в качестве посадочного материала использовать и дикую грибницу. Для этого ее отыскивают в природной среде обитания шампиньона двуспорового. Гриб произрастает в степной и лесостепной зонах. Иногда встречается на юге лесной зоны (примерно на широте Москвы). Начинают поиски грибницы в сентябре-начале октября, когда наступает пора плодоношения грибов. Сначала аккуратно удаляют с места-донора все плодовые тела. Затем снимают верхний слой перегноя до зоны почвы, переплетенной многочисленными белыми грибными нитями — гифами. Наклонившись, обнюхивают оголенный участок. В нос должен ударить резкий запах приятного грибного аромата. Ножом или мусорным совком извлекают крупные куски — блоки грибницы размером с кирпич
Далее их можно хранить в подсушенном состоянии в темном месте 30-40 дней. Следует заметить, что посадку культуры грибов при помощи дикой грибницы можно осуществлять в исключительных случаях, скорее ради эксперимента, нежели в качестве основного приема, поскольку трудно гарантировать ее 100-процентное приживление (в новых для нее условиях).